Kev txheeb xyuas txog kev kho noob caj noob ces yog kev soj ntsuam kev tshawb fawb ntawm cov khoom kho noob hauv cov ntsiab lus ntawm pharmacokinetics, pharmacodynamics, immunogenicity, kev nyab xeeb, thiab lwm yam hauv vivo. Gene therapy cov khoom yog ib hom tshuaj tshiab uas siv cov noob caj noob ces los yog cov txheej txheem kho cov noob los kho cov kab mob los yog kis tau tus kab mob, nrog rau cov yam ntxwv ntawm qhov tshwj xeeb, ntev ntev, thiab muaj peev xwm ua tau zoo. Tam sim no, cov khoom kho noob feem ntau suav nrog DNA liab qab, RNA, vector- hloov cov noob hloov pauv, thiab kho cov noob.
Vector-kev hloov pauv noob hloov pauv yog kev siv cov kab mob lossis tsis yog- cov kab mob kis mus rau xa cov noob hom phiaj mus rau hauv lub hom phiaj hlwb, ua rau nws nthuav tawm lossis koom ua ke rau hauv cov tswv tsev genome hauv cov hlwb. Vector-kev hloov pauv cov noob hloov pauv yog txoj kev kho noob feem ntau siv, thiab yog ib txoj hauv kev zoo tshaj plaws rau kev siv tshuaj kho mob. Ntawm lawv, adeno-cov kab mob sib txuas (AAV) vector yog ib qho tsis yog-pob, ib leeg- cov kab mob DNA tsis zoo, nrog rau qhov zoo ntawm kev nyab xeeb siab, tsis muaj kev tiv thaiv kab mob, muaj ntau lub tswv yim, thiab kev qhia ruaj khov. Nws raug suav hais tias yog ib qho ntawm qhov zoo tshaj plaws kev kho cov kab mob vectors.
Lub tswv yim bioanalytical rau AAV-raws li cov tshuaj kho noob yuav tsum tau tsim raws li nws cov tshuaj tshwj xeeb thiab cov yam ntxwv ntawm cov tshuaj. Feem ntau hais lus, cov hauv qab no yuav tsum tau xav txog:
- Kev raug tshuaj yeeb: Qhov concentration lossis luam tus naj npawb ntawm AAV vector thiab lub hom phiaj gene hauv cov ntshav lossis lwm yam tshuaj lom neeg, qhia txog kev faib tawm thiab tshem tawm cov tshuaj hauv vivo. Feem ntau tiag tiag -time quantitative PCR (qPCR) txoj kev yog siv los kuaj xyuas.
- Biodistribution: Kev faib tawm ntawm AAV vector thiab lub hom phiaj gene nyob rau hauv cov ntaub so ntswg thiab kab mob sib txawv, qhia txog lub hom phiaj thiab cov ntaub so ntswg tshwj xeeb ntawm cov tshuaj hauv vivo. Feem ntau qPCR los yog hauv situ hybridization (ISH) txoj kev yog siv rau kev tshawb nrhiav.
- Persistence thiab clearance: Lub sij hawm ciaj sia taus thiab tshem tawm txoj hauv kev ntawm AAV vector thiab lub hom phiaj noob hauv vivo, qhia txog kev ruaj ntseg thiab cov metabolism hauv cov tshuaj hauv vivo. Feem ntau qPCR lossis ISH txoj kev yog siv los kuaj xyuas.
- Viral shedding: Qhov muaj peev xwm ntawm AAV vector raug tawm los yog zais tawm ntawm lub cev los ntawm kev tso tawm los yog tso tawm, qhia txog qhov muaj feem cuam tshuam ntawm cov tshuaj rau ib puag ncig thiab lwm yam. Feem ntau qPCR los yog txoj kev kuaj kab mob kis tau siv los kuaj xyuas.
- Immunogenicity: Qhov ua tau ntawm AAV vector thiab lub hom phiaj gene ua rau lub cev tiv thaiv kab mob hauv lub cev, qhia txog qhov cuam tshuam ntawm cov tshuaj ntawm lub cev tiv thaiv kab mob. Feem ntau ELISA lossis electrochemiluminescence (ECL) txoj kev yog siv los kuaj xyuas cov tshuaj tiv thaiv -AAV antibody lossis anti- cov tshuaj tiv thaiv kab mob tiv thaiv kab mob, thiab ELISPOT lossis flow cytometry method yog siv los tshawb xyuas cov tshuaj tiv thaiv kab mob hauv lub cev.
- Kev tiv thaiv kab mob toxicity: Qhov ua tau ntawm AAV vector thiab lub hom phiaj gene ua rau kev tiv thaiv kab mob - cuam tshuam txog kev tsis zoo hauv lub cev, cuam tshuam txog kev cuam tshuam ntawm cov tshuaj rau lub cev kev nyab xeeb. Feem ntau Bio-Plex lossis ECL txoj kev yog siv los kuaj cov cytokines lossis inflammatory yam, thiab cov txheej txheem hematological lossis biochemical yog siv los kuaj ntshav lossis lub siab ua haujlwm.
